重组人MUC1-MBP融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及其免疫活性测定

摘要

目的:以MUC1为靶点研制抗肿瘤蛋白疫苗.方法:将MUC1基因连入pMAL-p2原核表达载体,并转化大肠杆菌,通过IPTG 诱导MUC1表达,经Western blot鉴定,Amylose 亲和层析纯化蛋白.用MUC1-MBP免疫健康C57BL/6小鼠,测定其免疫活性,通过ELISA测定血清中抗MUC1抗体的效价;采用MTT法测定小鼠脾CTL活性,通过3H-TdR掺入法测定T细胞增殖能力.结果:成功构建了pMAL-MUC1表达载体并得到稳定表达MUC1的菌株,鉴定了MUC1在大肠杆菌中的表达,纯化了MUC1蛋白.经重组MUC1-MBP免疫的C57小鼠,血清抗MUC1抗体的效价为1:5 760±3 221; 脾CTL 对MCF-7 及Lewis肺癌细胞的杀伤率分别为47.7%±4.3%和67.5%±6.5%.结论:人类重组MUC1融合蛋白可引发小鼠CTL反应和体液免疫应答,有希望研制成抗腺癌蛋白疫苗.