小鼠乳酸脱氢酶C亚基在大肠埃希菌中的表达与鉴定

摘要

目的 :构建小鼠特异性乳酸脱氢酶 (LDH)C亚基的原核重组载体并进行表达和鉴定。　方法 :提取小鼠睾丸总RNA ,逆转录合成cDNA ,自行设计引物 ,PCR扩增小鼠LDH C亚基编码序列 ,PCR产物经BamH Ⅰ/EcoR Ⅰ 双酶切后 ,克隆至谷胱甘肽S转移酶 (GST)融合表达载体pGEX 2T中 ,在E .coliBL2 1中诱导GST融合蛋白的表达。　结果 :在异丙基 β 硫代半乳糖苷 (IPTG)的诱导下 ,重组菌高效表达出一个相对分子质量约为6 0 0 0 0的产物。对重组质粒的序列分析表明 ,插入片段的序列与GenBank登录的编码序列完全一致。　结论 :小鼠LDH C亚基的全长编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX 2T ,并在E .coliBL2