共载siRNA与多西他赛的透明质酸修饰的还原敏感型纳米粒质量评价

摘要

研究和评价共载特异性抑制环氧化酶（COX-2）表达的小干扰RNA（siRNA）和多西他赛（DTX）的透明质酸修饰二硫键交联的聚乙酰亚胺（PEIss）与聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）形成的还原敏感型肿瘤靶向纳米粒（DTX/si COX-2/HRPSP NPs）的体外质量。首先,通过溶剂挥发法制备DTX/si COX-2/HRPSP NPs,同时制备不含二硫键交联的透明质酸修饰的PEI-PLGA纳米粒（DTX/si COX-2/HPP NPs）作为对照。结果显示,两者NPs呈核壳圆形,粒径处于150～200 nm之间,体外释放实验表明,DTX/si COX-2/HRPSP NPs中的DTX在24 h内呈现缓释行为,且HRPSP NPs在p H 5.0中8 h时的累积释药量较p H 7.4中释药量高10%～25%,证明酸性条件更有利于纳米粒中DTX的释放,具有肿瘤微环境敏感性。体外细胞摄取实验表明,当N/P比为40/1,孵育时间在14～16 h时,纳米粒的摄取量最高,受体靶向抑制试验显示,HRPSP NPs能特异性结合CD44受体,具有肿瘤细胞靶向性。最后,通过Western blot方法测定不同纳米粒对细胞内Bcl-2,bax,caspase-3和COX-2蛋白的相对表达效率。结果显示,实验组与对照组相比,促凋亡蛋白bax和caspase-3显著增加,抗凋亡蛋白Bcl-2显著下降,COX-2蛋白的表达也相应降低,尤其以DTX/si COX-2/HRPSP NPs组最为明显（P〈0.01）,实现了小分子药物和siRNA协同特异性治疗的目的。