少量胃癌细胞SHP1基因启动子区CpG岛甲基化的状态

摘要

目的检测胃癌细胞中SHP1基因启动子区CpG岛异常甲基化状态。方法使用甲基化分析软件Cpgplot预测SHP1基因转录起始位点-1 000 bp^1 340 bp区域的CpG岛并用MethPrimer软件设计甲基化特异性PCR(MSP)引物;建立一种基于Bisulfite修饰、无需提取DNA而直接检测少量细胞甲基化的新方法,并将其用于胃癌细胞SHP1基因启动子区甲基化状态的检测;克隆MSP产物、Sanger测序、分析测序峰图;比较Bisulfite修饰前后序列并分析CpG位点甲基化状态。结果 MSP引物均位于SHP1基因第一外显子区近转录起始位点;CpG岛长度>200 bp、GC含量>50%、Obs/Exp>0.60;MSP检测仅出现甲基化引物特异性扩增条带,提示该区域高甲基化。结论胃癌细胞中SHP1基因启动子区CpG岛存在高甲基化。