靶向性抗肿瘤融合基因RGD-IL-24重组腺病毒的构建及鉴定

摘要

目的:构建靶向性抗肿瘤融合基因RGD-IL-24的重组腺病毒载体,转染乳腺癌MCF-7细胞观察其感染,并对其体外抗肿瘤效应和肿瘤靶向性进行初步研究。方法:利用PCR技术将GRGDS序列融合至IL-24的N端,克隆至pAdTrack-CMV质粒上。经PmeI线性化后与腺病毒骨架pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒载体pAdEasy/RGD-IL-24。重组腺病毒载体经PacI线性化后转染293细胞,包装出重组腺病毒Ad.RGD-IL-24。PCR方法鉴定重组腺病毒,TCID50测定病毒滴度,MTT法和形态学分析Ad.RGD-IL-24诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡的活性,细胞黏附实验评价其肿瘤靶向性。结果:成功构建腺病毒载体,腺病毒滴度达1.3×109pfu/mL。Ad.RGD-IL-24诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡,显著抑制其生长,并具有肿瘤靶向性。结论:成功构建了有较强感染能力和肿瘤靶向性的重组RGD-IL-24腺病毒载体。