人IL-26的基因克隆及其真核表达载体的构建

摘要

目的:克隆人白细胞介-素26(human interleukin-26,hIL-26)基因,构建其真核表达载体并探讨在真核细胞中的表达。方法:提取人外周血单个核细胞总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增hIL-26基因;目的片段与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌E.coli-DH5α,菌落PCR、酶切分析和DNA序列分析鉴定重组克隆。用SalⅠ和EcoRⅠ将目的片段切下,插入pIRES2-EGFP的相应位点,构建表达载体pIRES2-EGFP/hIL-26并进行酶切鉴定。将重组质粒用非脂质体试剂Fugene 6转染至COS7细胞中。结果:重组克隆载体pMD18-T/hIL-26内插入片段序列与GenBank上报道的hIL-26基因序列完全一致;pIRES2-EGFP/hIL-26经酶切鉴定与预期结果一致;荧光显微镜观察可见转染后的细胞有荧光出现,Western blotting鉴定证明hIL-26基因得到了有效表达。结论:成功构建了hIL-26基因的真核表达载体并在真核细胞中获得了有效表达。