乙型脑炎病毒TaqMan逆转录聚合酶链反应检测方法的建立

摘要

目的采用TaqMan技术,研究建立实时荧光逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis,JEV)的效果。方法根据JEV非结构蛋白基因NS3基因序列(GenBank序列号,U15763),结合生物学软件序列比对分析,设计1对特异性引物和TaqMan寡核苷酸探针,优化荧光RT-PCR反应条件后,以模板梯度稀释法及相关毒株对比扩增检验测定方法的敏感度和特异性。结果引物和探针最佳浓度均为0.20μM,复性温度为55℃。方法至少检测出1copy/μl病毒RNA,与流感、麻疹、腮腺炎、风疹、水痘等病毒均无交叉反应。从病毒核酸提取至完成检测仅需3hr左右。结论所建立的JEV病毒TaqMan荧光RT-PCR方法敏感特异,有助于JEV感染的实验室早期快速诊断。