双氢青蒿素对前列腺癌PC-3细胞UCHL1基因转录调节的影响及机制

摘要

目的:探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对前列腺癌PC-3细胞泛素羧基末端水解酶1(ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase L1,UCHL1)基因转录调节的影响及机制。方法:将PC-3细胞分为空白组、DHA组及5-杂氮-2’脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)组(2.5μmol/L 5-Aza-CdR)。空白组为不加药物;DHA组根据浓度的不同再分为DHA1、DHA2、DHA3、DHA4组,DHA终浓度分别为12.5、25、50、100μmol/L。培养48 h后,收集细胞。应用real-time PCR检测UCHL1及DNA甲基化转移酶(DNA methyltransferase,DNMTs)的mRNA表达;亚硫酸氢盐基因组测序法(bisulfite genomic sequencing,BGS)检测UCHL1 CpG岛的甲基化状态;Western blot法检测UCHL1蛋白的表达。结果:DHA和5-Aza-CdR分别处理细胞后,UCHL1的启动子甲基化水平明显降低(χ2=150.1,P=0.000;χ2=127.7,P=0.000);UCHL1 mRNA表达水平明显上调(P均<0.05);UCHL1蛋白表达水平上升(P均<0.05),双氢青蒿素处理后甲基化转移酶的mRNA表达减少(P均<0.05)。结论:DHA可逆转PC-3细胞UCHL1基因的甲基化状态,其可能通过下调DNMTs的表达而影响DNA的甲基化过程。