HBsAg冲击的树突状细胞疫苗的制备及免疫活性研究

摘要

目的:探讨利用HBsAg冲击树突状细胞(Dendritic cells,DC)制备HBsAg-树突状细胞疫苗(HBsAg-DC疫苗)的基本方法并检测其免疫活性。方法:收集Lewis大鼠骨髓细胞,加入含rGM-CSF(4ng/ml)及rIL-4(8ng/ml)的RPMI1640培养7d后,加入HBSAg(100μg/ml)再培育48h,即获得HBsAg-DC疫苗。倒置显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测其表型;单向混合淋巴细胞反应评价HBsAg-DC疫苗的细胞免疫活性。结果:采用该方法可诱导扩增出较多数量和较高纯度DCs。HBsAg冲击DCs后,明显增强DCs的T细胞刺激活性。同种异体和自体之间T淋巴细胞增殖功能没有显著差异(P>0.05)。经HBsAg冲击后第3d(培养第10d)的DCs在异体T淋巴细胞增殖反应中能够诱导出很强的增殖应答反应;MTT比色法分析显示不同密度的DCs和HBsAg-DCs经丝裂霉素C处理后,均能明显刺激同种异体T细胞增殖,且该效应随着DCs和HBsAg-DCs数量的增加而逐渐增强(P<0.01);同密度的HBsAg-DCs比DCs的刺激作用更强,差异有显著性(P<0.01)。结论:本方法可以诱导扩增出较多数量和较高纯度DC,HBsAg-DC具有较强的抗原递呈能力。