基因工程乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)连续纯化流程的建立

摘要

研究了高效表达HBsAg的CHO-B43细胞系经转瓶培养所获液体的纯化流程,具体步骤是:细胞培养液经7 500r/min 4℃离心30分钟,除去脱落细胞及碎片,加固体硫酸铵达50％饱和度进行沉淀,离心后弃上清,再用45％的饱和硫酸铵重新悬浮,离心,保留沉淀物;正压超滤透析后,分别选用1.24g/cm^3和1.20g/cm^3的KBr浮力密度,相继进行两次32 000r/min 17℃ 46小时的平衡密度超速离心,收集HBsAg活性部分,过Sepharose 4B分子筛层析柱,再收集HBsAg活性峰,进行最后一次1.22g/cm^2 CsC1平衡密度梯度超速离心。由此流程HBsAg最终回收率为50％～65％,所获纯品纯度达95％以上,经电镜检查,牛血清残余量(<8.430ng/Dose)和细胞DNA残余量(<32pg/Dose),均符合WHO规定的基因工程HBsAg人体接种的标准。