随机肽库筛选赭曲霉毒素A模拟表位及其应用

摘要

目的从噬菌体随机肽库中筛选模拟赭曲霉毒素A表位的噬菌体粒子,并以其替代毒素建立免疫学检测方法.方法以抗赭曲霉毒素A的单克隆抗体为配基,免疫亲和筛选以融合蛋白形式表达在丝状噬菌体M13外壳蛋白Ⅲ上的随机七肽库,以ELISA方法鉴定阳性克隆,同时进行DNA测序确定插入七肽的氨基酸序列.结果经过4轮淘选,共筛选到11株能与该抗体特异性结合的阳性克隆,且该结合能被赭曲霉毒素A阴断,模拟表位的共有序列为:异亮氨酸-精氨酸-脯氨酸-蛋氨酸-缬氨酸-X-X,X为任意氨基酸.以其中阻亲和力最强的克隆(P 2)建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200～8 000pg/ml,检测下限为150 pg/ml.结论噬菌体展示技术可成功筛选到赭曲霉毒素A模拟表位,筛选到的噬菌体粒子可作为毒素的替代品建立免疫学分析方法.