人工红细胞及微囊包被血红蛋白的制备与鉴定

摘要

目的　确定有效制备及鉴定微囊包被血红蛋白和纳米级人工红细胞的方法。方法　首先通过低渗法制备高纯度、高浓度的血红蛋白 ,然后根据界面缩聚法的原理 ,利用匀速微囊制备喷头 ,将含有卵磷脂、聚乳酸的有机相 (丙酮、乙醇 )直接滴入含有 2 ,3 DPG和酶及抗氧化剂的血红蛋白水相中 ,通过高速搅拌使囊心物 (2 ,3 DPG与血红蛋白单体、二聚体构建的不稳定的四聚体 )的周围形成单个球状膜壳型微囊。结果　低渗法制备的血红蛋白浓度为 1 4 .1 g/dl,纯度为 97.7%。微囊包被血红蛋白其微囊呈圆球状 ,表面光滑均匀 ,微囊直径 0 .2 5 4 μm(电子显微镜下估算值 )。人工红细胞透射电镜 :单个包囊颗粒呈圆球状 ,有的表面光滑 ,有的表面稍有凹凸 ,平均粒径为2 1 0nm ,最小粒径为 1 90nm ;扫描电镜显示 :颗粒内部电子密度较高、不均匀 ,呈纤维状和细颗粒状交错分布 ,是为血红蛋白 ,颗粒边缘有一窄带 ,电子密度低于中央为膜层 ,平均粒径为 2 37nm。人工红细胞的包埋率为 2 7.7% ,泄漏率在 4℃生理盐水中 30d仅释放 6 .9%。结论　界面缩聚法可制备纳米级人工红细胞 。