测定谷胱甘肽-S-转硫酶动力学参数的变化表征其抑制剂

摘要

目的:测定谷胱甘肽-S-转移酶(Glutathione-S-transferases,GST)动力学参数变化,建立表征其抑制剂的方法。方法:从猪肝经阴离子交换层析和亲和层析制备GST酸性同工酶,用还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)和1-氯-2,4-二硝基苯(1,-chloro-2,4-dinitrobenzene,CDNB)合成S-(2,4-二硝基苯基)-谷胱甘肽(GS-DNB)为候选抑制剂,以GSH与CDNB为底物测定GST在GS-DNB作用下的米氏常数(Km)和最大反应速度(Vm),从而确定GS-DNB对GST的抑制常数(Ki)。结果:此GST被纯化146倍以上,活性总收率近30%。该GST对GSH和CDNB的Km分别为42μmol/L和0.86 mmol/L,属于随机双底物动力学模型。GS-DNB对CDNB竞争性Ki为(21±1)μmol/L(n=2);对GSH竞争性Ki为(17±1)μmol/L(n=2)。结论:产物GS-DNB是GST的高亲和力竞争性抑制剂;测定GST动力学参数随抑制剂浓度的变化可筛选其抑制剂。