新型抗病毒蛋白2CVN融合基因的构建、表达与纯化

摘要

目的构建新型抗病毒蛋白2CVN融合基因,增强CVN对病毒的结合性及中和活性,为进一步研究抗病毒药物奠定基础。方法采用PCR法,以pBluescriptⅡSK(+)-CVN质粒为模板,扩增CVN片段,在引物中引入Linker序列,将扩增的CVN片段与载体pET-CVN连接,构建pET-2CVN原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),进行表达及产物纯化。结果表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析,相对分子质量为29000,与理论预期值完全相符。凝胶成像分析表明目的蛋白表达量可占菌体总蛋白的31.48%,纯化后的目的蛋白纯度达95%以上。结论已成功构建了2CVN融合基因,并获得高效表达。