SUMO-β-抑制蛋白2融合基因的克隆、表达与蛋白纯化

摘要

2型糖尿病是一种常见的慢性疾病,其发生与胰岛素的耐受相关.β-抑制蛋白2(β-arrestin2)的缺失或功能紊乱,会导致胰岛素抵抗和2型糖尿病的发生.而使用β-arrestin2进行治疗可明显缓解葡萄糖不耐受及胰岛素抵抗.本研究通过重组PCR方法,将小分子泛素相关修饰物(small ubiquitin-related modifier,SUMO)与β-arrestin2基因融合,再将融合基因插入原核表达载体pET22b中,成功构建了pET22b-SUMO-β-arrestin2表达载体,将重组表达载体转入大肠杆菌Rosetta Blue(DE3)宿主细胞,使用IPTG在温度为20℃诱导表达,再将诱导表达后的蛋白经Ni-NTA进行纯化,成功获得SUMO-β-arrestin2蛋白,为后续β-arrestin2药效学的研究奠定基础.