柔嫩艾美球虫(Eimeria tenella)体外细胞培养

摘要

试验比较了玻璃珠层析法、ＤＥＡＥ纤维素层析法、Ｇ３漏斗过滤法３种提纯柔嫩艾美球虫（Ｅｉｍｅｒｉａｔｅｎｅｌｌａ）子孢子的方法。柱高８ｃｍ、直径２００μｍ的玻璃珠柱用ｐＨ８．０的Ｒｉｎｇｅｒ′ｓ缓冲液作洗脱液提纯子孢子，回收率为６４．１％，子孢子洗脱高峰期集中，且易于无菌操作；柱高５ｃｍ的ＤＥＡＥ纤维素柱用ｐＨ８．０的甘氨酸缓冲液作洗脱液，提纯子孢子回收率为６３．２％，但严格无菌操作困难；Ｇ３漏斗法易无菌操作，方法简便，但提纯效果不理想，回收率为２５％，有少量杂质。结果表明，玻璃珠柱层析法可作为细胞培养用提纯子孢子的首选方法。提纯的子孢子接种于体外培养的鸡原代肾细胞，在ＭＥＭ细胞形成培养液（含１０％的犊牛血清）和ＭＥＭ细胞维持培养液（含５％的犊牛血清和５％的水解乳蛋白）体外细胞培养系统中，能够发育到卵囊阶段；Ｅ．ｔｅｎｅｌａ在体外细胞培养中的发育与鸡体内发育的过程和时间基本相似，都经过子孢子→第一代裂殖体→第二代裂殖体→配子体→卵囊等阶段。试验也表明，水解乳蛋白作为营养补充物是Ｅ．ｔｅｎｅｌａ子孢子发育到卵囊的重要因素。