三种丙型肝炎包膜感染性假病毒颗粒的制备及初步应用研究

摘要

本研究构建携带HCV代表株H77（1a）、中国HeBei株（1b）以及JFH-1株（2a）丙型肝炎病毒完整的E1-E2包膜糖蛋白基因的表达质粒，间接免疫荧光法及Western blot验证了其在细胞膜（293细胞）上的正确表达。三种包膜质粒分别与慢病毒包装质粒pHR’CMV△8．2及携带EGFP报告基因的自灭活（Self—Inactivating，SIN）转移质粒pCS-CG共转染293FT细胞，产生三种不同基因型的丙型肝炎包膜感染性假型（pseudotyped）病毒颗粒，免疫荧光与Western blot分析验证了E1／E2包膜糖蛋白在假病毒颗粒上的表达与掺人，利用p24 ELISA法及感染性实验对HCV假病毒进行滴定。从上清中获得的HCV假病毒可以在体外感染肝癌细胞系Huh7及Huh7-CD81（且后者上的感染效率约为前者上的2～3倍）；利用针对HCVE2蛋白的具有广谱交叉中和活性的单克隆抗体AP33建立了基于上述假病毒颗粒的丙肝病毒体外中和抗体滴定方法，并应用于丙型肝炎患者体内的中和抗体水平的研究。本研究成功包装了包括中国流行株在内的3种不同基因型的HCV包膜感染性假病毒颗粒并建立了基于假病毒颗粒的HCV体外中和抗体检测方法，为研究HCV感染早期特性及特异抗病毒药物的体外筛选提供了有效模型，并可用于HCV感染者体内及HCV基因工程疫苗免疫后中和抗体水平的分析。