体外筛选针对大鼠Toll样受体4mRNA的小分子干扰RNA序列

摘要

目的:筛选能高效干扰大鼠Toll样受体4(Toll—like receptor4,TLR4)mRNA的最佳小分子干扰RNA(smallinter-feringRNA,siRNA)序列。方法:克隆大鼠TLR4基因全长,将TLR4基因与含增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluores-centprotein,EGFP)的质粒pEGFP—C1重组,构建pEGFP—rTLR4,化学合成法合成3对干扰大鼠TLR4的siRNA后,将3对siRNA、阴性对照siRNA和干扰EGFP的siRNA分别与pEGFP—rTLR4经Lipofectamine2000共转染HEK-293细胞株,通过倒置相差显微镜和流式细胞仪观察EGFP的荧光强度。结果:与阴性对照组相比,3对针对TLR4的siRNA及针对EGFP的siRNA均明显抑制EGFP的荧光表达(P75%。结论:成功筛选出体外可高效干扰大鼠TLR4mRNA的siRNA片段。