稳定低表达BAG3的胶质母细胞瘤U87细胞株的构建及鉴定

摘要

目的探讨构建稳定低表达BAG3的胶质母细胞瘤U87细胞株的方法。方法利用RNA干扰技术提取pEGFP-BAG3-sh RNA质粒后采用ABI3130基因测序仪进行测序鉴定,将鉴定后的质粒分别转染到胶质母细胞瘤U87细胞株,利用嘌呤霉素筛选转染的U87细胞,通过RT-PCR、免疫印迹分析和免疫荧光染色等技术对转染后的U87细胞进行鉴定。结果 pEGFP-BAG3-shRNA质粒测序结果包含干扰序列,筛选后的干扰组和对照组U87细胞转染效率分别为85%和93%,RT-PCR结果显示sh BAG3质粒干扰组BAG3 mRNA表达量显著低于对照组(P<0.05);免疫印迹分析及免疫荧光染色结果显示shBAG3质粒干扰组BAG3蛋白表达量显著低于对照组(P<0.05)。结论本研究所构建的胶质母细胞瘤U87细胞株能稳定低表达BAG3,可用于后续BAG3在胶质母细胞瘤中的生物学作用及相关信号通路的研究。