酶联免疫吸附分析方法(ELISA)检测血浆中糖基化终极产物

摘要

目的　建立竞争性ELISA方法 ,测定血液中的高级糖化终产物的含量。方法　对兔及牛血浆白蛋白进行体外葡萄糖修饰 ,得到糖基化终极产物抗原 ;用兔此抗原免疫新西兰大白兔得到与其特异结合的抗体。结果　 1 经过TNBS方法及聚丙稀凝胶电泳鉴定修饰抗原 ,发现修饰前后蛋白携带自由氨基数至少 35 %已被葡萄糖修饰且分子量也发生变化。 2 免疫获得抗糖基化终极产物的多克隆抗体 ,并鉴定了此多抗只抗葡萄糖修饰的蛋白而不抗载体蛋白。3 用葡萄糖修饰的蛋白及其多克隆抗体制成ELISA试剂盒 ,批间、批内变异系数分别为 5 8%和 9 8% ,灵敏度为 0 5u/ml。结论　得到检测血浆糖基化终极产物的ELISA试剂盒。