5α-双氢睾酮对前列腺癌LNCaP细胞钙离子移动和细胞生长的影响

摘要

目的:探讨5α-双氢睾酮(DHT)对前列腺癌LNCaP细胞钙离子移动的影响及其机制。方法:应用Fura-2/AM Ca2+荧光探针法结合MiraCal荧光成像系统动态检测DHT刺激以及Ca2+通道阻滞剂干预后LNCaP细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的变化。应用MTT法观察细胞活力,流式细胞仪观察早期细胞凋亡率。结果:DHT浓度为1、10、100和1000nmol/L时,能快速诱导[Ca2+]i升高,在20s～3min升至峰值。细胞外液无Ca2+时,1000nmol/L DHT未能诱导[Ca2+]i升高。细胞膜L-型电压门控Ca2+通道阻滞剂维拉帕米(50μmol/L)、地尔硫(100μmol/L)或硝苯地平(5mmol/L)37℃孵育细胞5min后,能完全抑制1000nmol/L DHT诱导的[Ca2+]i升高。磷脂酶C抑制剂新霉素(1mmol/L)37℃孵育细胞5min或兰尼定受体阻滞剂普鲁卡因(50mmol/L)37℃孵育细胞3min后,对1000nmol/L DHT诱导的[Ca2+]i升高没有影响。1000nmol/LDHT作用细胞48h后,与1000nmol/L DHT作用前用维拉帕米预孵细胞相比,细胞光密度(D)值[(0.67±0.10)vs(2.13±0.16))和早期细胞凋亡率[(14.31±2.29)%vs(1.07±0.19)%]差异有统计学意义(P<0.01)。结论:DHT可快速地、剂量依赖性地诱导LNCaP细胞[Ca2+]i升高;DHT诱导的LNCaP细胞[Ca2+]i的升高是通过细胞外Ca2+经细胞膜L-型电压门控Ca2+通道流入细胞内实现的,细胞内贮钙库未释放Ca2+。DHT诱导的LNCaP细胞[Ca2+]i升高促进细胞凋亡、抑制细胞生长。