半夏叶片总RNA四种提取方法及效果的比较

摘要

目的 针对三叶半夏成熟叶片化学成分复杂，富含多糖、酚类及其他多种化学物质的特点，选择优化一种简便、经济、高效的半夏成熟叶片高质量总RNA提取方法。方法 用4种不同的RNA抽提方法如异硫氰酸胍法、皂土法、CTAB—LiCl法和改进的SDS／酚法提取总RNA，通过电泳、紫外分光光度计检测以及RT-PCR验证等对提取结果进行分析比较。结果 4种方法均能从半夏成熟叶片中提取到总RNA。其中皂土法的提取过程只需3～4h，是其他3种提取方法所用时间的一半。提取1g叶片的成本只有其他3种方法的1／13～1／14。此法提取的总RNA18S、28S带型清晰无弥散，完整性好，无严重的蛋白质和其他杂质污染，A260/A280为1．8～2．O，A260／A230大于2．O，且总RNA的产率高，为365．744μg／g鲜重，提取的总RNA适用于RT-PCR试验。结论 皂土法提取的RNA完全适用于DDRT-PCR、Northern blotting、cDNA文库构建等分子生物学研究，是一种快速、经济，适于抽提半夏总RNA的好方法。