人IL-4重组逆转录病毒载体的构建及在人肿瘤细胞中的表达

摘要

利用多聚酶链反应（ＰＣＲ）方法，从ＰＣＤ－ｈＩＬ－４质粒中扩增得到人白细胞介素４（ｈＩＬ－４）的ｃＤＮＡ－。ＤＮＡ序列测定证实此片段包含完整的ＩＬ－４开放阅读框架。应用ＤＮＡ重组技术，将此ｃＤＮＡ重组于逆转录病毒载休ＬＸＳＮ。用脂质体转染法将此重组质粒导入病毒包装细胞ＰＡ３１７。得到滴度为２．５ｘ１０ＣＦＵ／ｍｌ的感染性病毒。病毒感染人白血病细胞株ＨＬ－６０、Ｋ５６２及Ｂｕｒｋｉｔ淋巴瘤细胞株Ｒａｊｉ，使之表达并分泌ＩＬ－４。逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）法证实ｈＩＬ－４ｃＵＮＡ可在上述肿瘤细胞中持续转录。ＥＬＩＳＡ怯证实病肿瘤细胞分辨ＩＬ一４水平可高达３００Ｐ／１０细胞．２４小时。本研究为进一步探讨转ＩＬ一４基因用于血液系统恶性肿瘤免疫治疗的价值提供了基础。