产甘油假丝酵母产甘油关键酶基因在酿酒酵母中的表达

摘要

甘油是一种极其理想的耐高渗透压介质。利用PCR方法,从产甘油假丝酵母WL2002-5中扩增出了2个产甘油的关键酶基因GPD和GPP,分别编码3-磷酸甘油脱氢酶(glycerol3-phosphatedehydrogenase,GPD)和3-磷酸甘油磷酸酶(glycerol3-phosphate phosphatase,GPP)。利用T-Vector在Escherichia coliJM109中克隆得到大量的GPD和GPP基因,并成功构建了重组质粒pYX212-GPD和pYX212-GPP;通过LiAc转化法将重组质粒导入酿酒酵母Saccharomyces cerevisiaeW303-1A。初步实验结果表明发酵过程中pYX212-GPD/S.cerevisiaeW303-1A的生物量高于pYX212-GPP/S.cerevisiaeW303-1A和野生型S.cerevisiaeW303-1A;发酵72h后,pYX212-GPD/S.cerevisiaeW303-1A发酵液中甘油含量大约为12mmol/L,明显高于野生型S.cerevisiaeW303-1A的甘油含量,而pYX212-GPP/S.cerevisiaeW303-1A与野生型S.cerevisiaeW303-1A在甘油含量上相差不大,均只有4mmol/L左右。