小干扰RNA(siRNA)对马立克氏病淋巴瘤细胞chTERT基因表达的抑制

摘要

为通过体外转录的小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)抑制马立克氏病淋巴瘤细胞(MDCC-MSB1)中鸡端粒酶反转录酶(Chicken telomerase reverse transcriptase,chTERT)mRNA的表达,探讨chTERT在MDCC-MSB1中的作用,本试验设计了针对chTERT mRNA的特异siRNA序列(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3),利用T7 RNA聚合酶体外转录系统,制备21 bp的siRNA分子,通过脂质体介导转染MDCC-MSB1细胞,采用荧光实时相对定量RT-PCR方法检测转染细胞chTERT基因mRNA的相对表达量,流式细胞仪测定转染细胞周期变化情况。结果显示,siRNA-1和siRNA-3组在转染24 h后,有效地抑制了chTERT mRNA的表达,抑制率分别为68%和81%。细胞周期检测结果显示,与对照组相比,siRNA-1和siRNA-3转染组细胞在转染后24 h G0/G1期比例显著上升(P<0.05),S期比例显著下降(P<0.01),从而表明chTERT表达量的降低可有效抑制MDCC-MSB1细胞增殖。siRNA可有效抑制MDCC-MSB1细胞中chTERT基因的表达,而chTERT表达量的降低对MDCC-MSB1细胞增殖具有明显的抑制作用。