人R_O蛋白(60kD)编码序列的PCR产物在E.coli中的克隆与表达

摘要

通过聚合酶链反应 ( PCR)自人脾 c DNA扩增 RO 蛋白 ( 60 k D)编码 DNA片段 .将该片段定向插入麦芽糖结合蛋白 ( MBP)融合系统的 p MALTM- c载体中并转化 E.coli ( DH5α) ,通过酶联免疫印迹 ( IBT)筛选出具有 RO 抗原性的阳性克隆 .绝大部分阳性克隆表达完整的 RO 融合蛋白 ( 1 0 0k D) .但在传代过程中表达水平很快降低 ;少数阳性克隆虽然表达非完整 RO 融合蛋白 (分子量 <80k D) ,但表达水平却高而且稳定 .同时保留了很强的 RO 抗原性 .产生非完整融合蛋白的一个原因是 ,PCR碱基错配引起 RO 编码 DNA的序列缺失 ;