突变型猪表皮生长因子在毕赤酵母中的表达

摘要

使用α因子做为信号肽的酵母系统分泌表达猪表皮生长因子(pEGF)时,由于对信号肽末端Glu-Ala氨基酸残基切除不完全,表达产物是Glu-Ala-pEGF和pEGF的混合物。本研究为了获得单一表达的pEGF产物,对pEGF基因进行适当的突变修改,构建缺失Glu-Ala重复基因序列的重组载体。把重组载体pPIC9-pEGF1-48电转化毕赤酵母,用同位素标记随机引物斑点杂交法筛选多拷贝整合转化子,并诱导大量表达。用硫酸铵沉淀及超滤的方法浓缩和纯化蛋白,并用Bradford检测方法对蛋白浓度进行了初步测定。结果表明,构建的重组载体经过BglⅡ线性化后稳定转入毕赤酵母中,转化子表型主要为MutS型;筛选的多拷贝MutS型转化子经诱导后成功表达约6000的pEGF1-48蛋白,经检测蛋白表达水平约为34mg/L。