P1/Fas-CCL19双表达重组腺病毒载体的构建及表达鉴定

摘要

目的利用pAdEasy-1腺病毒包装系统构建血型B抗原模拟多肽P1/Fas-CCL19双表达重组腺病毒,并在体内外试验中验证其表达及可能的疗效。方法应用腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV、骨架质粒pAdEasy-1构建重组腺病毒质粒pAd-CMV-P1/Fas-CCL19并转染至HEK293A细胞,获得重组腺病毒Ad-P1/Fas-CCL19颗粒后进一步感染乳腺癌4T1细胞并鉴定转染4T1细胞内P1/Fas-CCL19mRNA和蛋白质的表达。构建经人B型血红细胞免疫的4T1荷瘤小鼠模型,比较瘤内注射重组腺病毒Ad-P1/Fas-CCL19组、空腺病毒组、0.9%氯化钠溶液组的荷瘤小鼠的肿瘤变化及生存期。结果感染后4T1细胞中P1/Fas-CCL19 mRNA和蛋白质均有表达。瘤内注射重组腺病毒Ad-P1/Fas-CCL19较瘤内注射空腺病毒、0.9%氯化钠溶液明显抑制4T1肿瘤的生长,但三组小鼠的生存期无明显区别。结论 P1/Fas-CCL19重组腺病毒载体成功构建,体内外实验均证明了其稳定表达及有效性,为进一步临床研究奠定了基础。