两种不同玻璃化冷冻方案对小鼠卵母细胞纺锤体的影响

摘要

目的:探讨两种不同的玻璃化冷冻方案对小鼠第二次减数分裂中期卵母细胞纺锤体的影响。方法:实验分3组:方案A组、方案B组和对照组(新鲜卵母细胞)。均以冷冻环为载体,方案A组用乙二醇(EG)作为冷冻保护剂,方案B组用乙二醇联合二甲亚砜(DMSO)作为冷冻保护剂,用直接投液氮高速制冷冷冻小鼠卵母细胞;解冻后3h小鼠卵母细胞经固定并用间接免疫荧光法染色微管及染色体,观察纺锤体及染色体的形态。结果:两种玻璃化冷冻方案中,卵母细胞解冻后的存活率差异无显著性(80.3%vs87.5%,P>0.05);经玻璃化冷冻方案A冷冻的卵母细胞解冻后具有完整纺锤体结构的卵母细胞数显著低于对照组和方案B组(15.2%vs78.7%,15.2%vs77.5%,P0.05);方案A组解冻后具有正常染色体的卵母细胞数显著低于对照组和方案B组(17.4%vs76.6%,17.4%vs72.5%,P0.05);方案A组异常染色体数显著高于对照组和方案B组(82.6%vs19.1%,82.6%vs27.5%,P0.05)。结论:改变玻璃化冷冻方案有利于保持解冻后小鼠卵母细胞纺锤体结构完整性。