细粒棘球蚴(中国大陆株)线粒体苹果酸脱氢酶重组蛋白的表达、纯化及免疫特性分析

摘要

目的对细粒棘球蚴(中国大陆株)线粒体苹果酸脱氢酶(Eg mMDH)重组质粒进行原核表达、纯化,并初步鉴定重组蛋白的免疫学特性。方法对已构建的基因工程菌株mMDH/pGEM-T/JM109进行酶切,获取目的基因。将目的基因重组到pET28a表达载体上,筛选阳性表达菌株并进行诱导表达,经SDS-PAGE鉴定重组mMDH蛋白质为包涵体后,超声破碎细胞,尿素溶解包涵体,镍柱亲和层析法纯化,获取重组蛋白。以纯化的mMDH作抗原免疫小鼠,用Western blot和ELISA方法检测重组蛋白的免疫原性及免疫鼠血清抗体水平。结果成功构建原核重组表达载体mMDH/pET28a/BL21,并纯化出浓度较高的重组蛋白。ELISA结果显示,重组抗原免疫小鼠诱导产生了一定水平的血清抗体;Western blot显示,原头蚴、囊液等天然抗原能被重组抗原免疫的小鼠血清识别。结论纯化后的重组蛋白mMDH具有较强的免疫原性,有望作为包虫病候选疫苗,值得进一步深入研究。