副流感病毒核衣壳蛋白的基因克隆、原核表达与多克隆抗体制备

摘要

目的表达Ⅱ型副流感病毒核衣壳蛋白,为制备抗体作前期工作。方法从分离培养的Ⅱ型副流感病毒标本中RT-PCR扩增出核衣壳蛋白基因,NdeⅠ和HindⅢ双酶切PCR产物,定向连接到原核表达载体pQE2中,得到重组表达质粒pQEHpI2NP,重组表达质粒进行DNA测序鉴定,转化大肠杆菌BL21(DE3)。IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白的表达。利用Ni-NTAagarose纯化带6个组氨酸标记的重组蛋白,重组蛋白免疫小鼠,制备抗HpI2NP多抗,Hep-2细胞培养的Ⅱ型副流感病毒制备可溶性抗原。Western-blot分析。结果构建了表达重组质粒pQE2_HpI2NP,测序鉴定了克隆序列的准确性,在大肠杆菌中成功地表达并纯化得到重组核衣壳蛋白。经Western-blot证实,重组蛋白免疫的小鼠血清与细胞培养的Ⅱ型副流感病毒核衣壳蛋白有特异性反应。结论成功表达了Ⅱ型副流感病毒核衣壳蛋白,并制备了抗HpI2NP多抗。