胚胎面突外胚间充质细胞的培养鉴定及向平滑肌细胞的自分化研究

摘要

目的　探讨胚胎面突外胚间充质细胞在体外的生长特性、表型特征及在无分化抑制剂 -白血病抑制因子 (L IF)的 DMEM/ F12培养基中向平滑肌细胞自分化的过程。　方法　取孕 5 0天人胚面突 ,用消化法培养获得外胚间充质细胞 ,倒置显微镜下观察细胞形态和生长情况 ,免疫组织化学鉴定细胞分化表型。用无 L IF的 DMEM/ F12培养基培养 ,2天后进行抗α-平滑肌肌动蛋白 (α- SMA)单克隆抗体免疫组织化学检测 ,通过 RT- PCR在 m RNA水平检测α- SMA的表达 ,透射电镜观察细胞超微结构。　结果　培养的细胞呈单层生长 ,成纤维状 ,长梭形 ,有 2～ 4个突起 ,抗人自然杀伤细胞标志、波形丝蛋白、S- 10 0蛋白、神经元特异性烯醇化酶、肌红蛋白及 因子染色阳性 ,抗神经胶质纤维酸性蛋白、神经纤维细丝蛋白、α- SMA、角蛋白染色阴性。去除 L IF2天后 ,抗 α- SMA免疫组织化学检测呈阳性 ,RT- PCR显示细胞在 RNA水平表达平滑肌细胞特异的 α- SMA,透射电镜可见超微结构与平滑肌细胞相类似。　结论　所获得的外胚间充质细胞具有干细胞特性。在无分化抑制剂存在时 ,面突外胚间充质细胞呈明显向平滑肌细胞的自然分化。