重组人可溶性凋亡素-2配体在Pichia系统中的表达

摘要

目的 :在甲醇营养型酵母 (Pichia)表达系统中表达重组人可溶性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (TRAIL ,凋亡素 - 2配体 )分子。 方法 :人可溶性 TRAIL编码基因片段插入 p IC 3.5酵母表达载体 ,氯化锂转化酵母 GS115株 ,甲醇诱导表达 5 d,SDS- PAGE和 Western- blotting确认表达 ,L 92 9细胞鉴定活性。结果 :发现在酵母细胞中重组表达的 TRAIL在 SDS-PAGE上占总蛋白的 5 0 %以上 ,用抗人 TRAIL多抗可以确认表达了 TRAIL重组分子 ,杀伤肿瘤细胞的比活性较原核表达后复性的 TRAIL有明显提高 ,并能诱导几株肿瘤细胞 DNA片段化 ,说明 TRAIL可能已正确折叠并形成活性必需的高级结构。结论 :在 Pichia系统中正确表达了人可溶性 TRAIL分子。