α1-酸性糖蛋白单克隆抗体的制备及检测方法的建立

摘要

目的制备α1-酸性糖蛋白（α1-Acid glycoprotein，α1-AGP）单克隆抗体（McAb），建立α1-AGP的ELISA检测方法，用于检测人体血液、尿液及各种组织液中α1-AGP的水平。方法用高氯酸沉淀人血清中α1-AGP，经离子交换层析和高压液相层析纯化后，免疫BALB／c小鼠，建立特异性抗α1-AGP单克隆抗体杂交瘤细胞株，制备并鉴定McAbs，分析各株分泌抗体的效价、特异性、位阻群、类及亚类。制备针对α1-AGP的双抗体夹心ELISA检测试剂盒，分析其稳定性、灵敏度和特异性，并进行临床评价。结果建立了9株特异性抗α1-AGP单克隆抗体杂交瘤细胞株，均分泌IgG抗体，所有抗体的轻链均为κ链。根据位阻分析结果，将9个细胞株分泌的抗体分为5个位阻群，腹水效价在1×10-4 - 1×10^-7之间，且均有较好特异性。制备的α1-AGP双抗体夹心ELISA试剂盒灵敏度达2ng/ml，且检测结果与α1-AGP含量呈现良好的线性关系（r=0．9916），并与其他血清蛋白无交叉反应，试剂盒置37℃放置3d及4℃放置2个月，稳定性良好。用该试剂盒检测96份正常人血样，其α1-AGP平均值为0．43—1．32mg／ml；105份Ⅱ型糖尿病患者血样，其平均值为0．88—2．35mg／ml，经统计学分析，两者差异有显著意义。结论已成功制备出α1-AGPMcAb，并建立了针对α1-AGP的双抗体夹心ELISA，制备的试剂盒可用于临床检测。