体外化学合成bcl-2 siRNA及脂质siPORT脂质体转染siRNA至细胞HL-60的鉴定

摘要

目的　为将RNA干扰技术深入应用到血液肿瘤做铺垫 ,体外化学合成bcl 2小干扰RNA(small interferenceRNA ,siRNA)及si PORT脂质体转染siRNA至细胞HL 6 0的鉴定。方法　通过互联网从GenBank获得人bcl 2mRNA全序列 ,经扫描bcl 2mRNA的全序列记录AA及下游 19个核苷酸肽并与基因组数据库比较去除与其它基因有高度同源性的序列 ,选取距离AUG启动子约 30个核苷酸以后的靶序列作siRNA模板的设计 ,且GC含量控制在 30 %～ 6 5 %之间。选择了三条序列作为我们实验设计的靶序列并由靶序列设计合成出它们的正、反义寡核苷酸肽模板。由化学合成试剂盒体外合成双链bcl 2siRNA ,纯化并定量后用Cy3红色荧光标记 ,利用脂质siPORT转染试剂将bcl 2siRNA转染入HL 6 0细胞 ,转染 4 8h后收集并固定细胞 ,荧光显微镜下观察转染结果。结果　纯化的siRNA经 2 %琼脂糖凝胶电泳证实其长度为 2 1bp ,说明bcl 2siRNA被成功合成。转染Cy3标记的siRNA 4 8h后的细胞荧光显微镜下经绿色光激发可见较亮的深红色荧光 ,而未转染bcl 2siRNA的细胞仅有微弱的红色自发荧光。结论　体外成功化学合成bcl 2siRNA ,LipidsiPORT转染试剂能将bcl 2siRNA成功转染入白血病细胞HL 6 0中。