聚氨酯介导TRIB2-siRNA转染人源脂肪干细胞的体外成脂分化

摘要

目的使用阳离子型聚氨酯(cationic polyurethane,CPU)介导TRIB2-siRNA体外转染人源脂肪干细胞沉默TRIB2基因表达,研究基因沉默效率及基因沉默对干细胞成脂分化的影响。方法在氮/磷(N/P)为10∶1的条件下,混合CPU与TRIB2-siRNA或阴性对照siRNA(NC)制备复合物,并转染人源脂肪干细胞。将CPU/TRIB2-siRNA作为实验组,CPU/NC作为阴性对照组,Lipofectamine^(TM)2000/TRIB2-siRNA作为阳性对照组,未处理的干细胞作为空白对照组,使用实时荧光定量PCR检测干细胞内TRIB2的mRNA表达;使用Alamar Blue法检测干细胞的存活率;应用激光共聚焦显微镜观察复合物的细胞吞噬情况;用油红O染色法在光学显微镜下观察干细胞的成脂情况。结果与空白对照组比,CPU/TRIB2-siRNA实验组有效沉默了TRIB2 mRNA,差异有统计学意义(P<0.001);实验组的沉默效果较阳性对照组更好(P<0.001);实验组的细胞存活率接近100%。CPU能介导TRIB2-siRNA在8 h后逃逸溶酶体。油红O染色及定量分析表明,实验组在诱导28 d后出现较多的脂滴。结论聚氨酯作为载体可有效递送TRIB2-siRNA进入脂肪干细胞并降低TRIB2 mRNA的表达,进而促进脂肪干细胞向脂肪的分化。