胰腺癌细胞survivin表达RNAi抑制载体的构建及其抑制作用的研究

摘要

目的构建胰腺癌细胞生存蛋白(survivin)表达的RNA干扰(RNAi)抑制载体,并研究其对survivin表达的抑制作用。方法用免疫荧光技术和RT-PCR检测胰腺癌细胞PANC-1中survivin及其mRNA的表达,并把survivin基因克隆到T载体进行测序;构建针对survivin缺失碱基基因和survivin基因的RNAi载体si-svv-1和si-svv-2,用脂质体转染胰腺癌细胞PANC-1后,用RT-PCR、DNA梯状电泳及流式细胞术分析比较2种干扰载体对survivinmRNA表达的抑制情况和检测细胞凋亡。结果survivin在胰腺癌细胞PANC-1中高表达;si-svv-2对survivinmRNA的表达抑制率达(72.43±8.04)%,而si-svv-1为0;si-svv-2能诱导胰腺癌细胞PANC-1的凋亡,72h细胞凋亡率达(12.36±1.44)%。结论本研究成功建立胰腺癌细胞survivin表达RNAi抑制载体,该载体可特异有效地抑制胰腺癌细胞PANC-1survivin的表达并诱导胰腺癌细胞PANC-1凋亡。