RNAi人端粒酶逆转录酶基因腺病毒表达载体的构建及对肾癌细胞生长的抑制作用

摘要

目的构建表达端粒酶逆转录酶（hTERT）基因小干扰RNA（siRNA）腺病毒载体,观察其对肾癌细胞系Ketr-3生长抑制作用。方法将病毒Ad-hTERT体外感染人肾癌细胞系Ketr-3,分别用结晶紫染色、噻唑蓝（MTF）法检测其对细胞生长的影响,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定hTERT基因mRNA的表达水平,免疫组织化学检测hTERT抗原的表达。结果结晶紫、MTT结果表明:在MOI=50时,Ad-hTERT感染的Ketr-3细胞发生明显病变;MOI=50的Ad-hTERT感染Ketr-3细胞后,在第3、5、7天细胞存活率分别为（92.3±1.2）%、（82.0±1.0）%和（72.0±1.0）%,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;RT-PCR结果表明:病毒Ad-hTERT感染Ketr-3细胞3 d后,hTERT mRNA表达是对照组的（50.5±1.7）%,差异有统计学意义（P＜0.01）;免疫组织化学结果表明:Ad-hTERT处理组的hTERT抗原表达较对照组显著减少。结论转录hTERT基因siR- NA的重组腺病毒载体为肾癌基因治疗提供了新的工具。