BMP13在C3H10T1/2干细胞向心肌细胞分化过程中的作用

摘要

目的研究骨形态形成蛋白13(bone morphogeneticproteins 13,BMP_(13))促骨髓间充质干细胞C_3H10T_(1/2)向心肌样细胞分化过程中的作用。方法骨髓间充质干细胞C_3H10T_(1/2)经pAdEasy-BMP13重组腺病毒质粒感染后,利用Western blot以及免疫荧光技术于1、2、3周时分别检测C3H10T1/2干细胞心肌特异性蛋白cTnT、Cx43、α-MHC、α-actin的表达变化;同时以实时荧光定量PCR技术进行心肌分化特异性基因GATA4、MEF2C的检测,4周后应用电子显微镜观察干细胞超微结构变化。结果 C_3H10T_(1/2)干细胞经pAdEasy-BMP13感染诱导后,细胞开始伸展,折光性增强,细胞间连接较紧密且细胞排列趋向一致;pAdEasy-BMP_(13)和pAdEasy-BMP_2感染后细胞于3周时,Western blot技术检测出心肌特异性肌钙蛋白(cardiacisoform of tropnin T,cTnT)、连接蛋白Cx43(connexin xonnexin43,Cx43)(P<0.05),免疫荧光检测有蛋白α-MHC、α-actin表达,而于1周和2周时未检测出。同时pAdEasyGFP感染后细胞和未感染组细胞1、2周和3周均未发现有心肌特异性蛋白cTnT、Cx43、α-MHC、α-actin的表达。各组均出现心脏早期发育特异性基因GATA4、MEF2C的表达,但pAdEasy-BMP_(13)和pAdEasy-BMP_2感染后细胞表达量明显高于pAdEasy-GFP感染后细胞和未感染组细胞(P<0.05);pAdEasy-BMP13感染后细胞于4周时透射电镜下观察出现闰盘及肌丝样细胞超微结构,而pAdEasy-GFP感染后细胞和未感染组细胞没有出现类似结构。结论 pAdEasy-BMP_(13)可以诱导C_3H10T_(1/2)干细胞向心肌样细胞分化。