抗cH5/3抗体Luminex检测系统的构建及其在HA杆部抗体应答研究中的初步应用

摘要

目的 构建抗嵌合血凝素cH5/3抗体Luminex检测系统,并初步应用于流感病毒诱导HA杆部抗体研究中对低水平抗HA杆部抗体的检测.方法 根据 GeneBank 中 A/VietNam/1203/04 (H5N1 )流感病毒 H5 头部和 A/Perth/16/2009 (H3N2)病毒H3杆部基因序列,人工合成嵌合血凝素cH5/3基因;构建重组Bacmid-cH5/3 质粒;重组质粒在sf9 细胞中包装成重组cH5/3杆状病毒,并进行PCR及测序鉴定.利用杆状病毒表达系统表达cH5/3 蛋白,将纯化蛋白与活化后的微球偶联,构建抗cH5/3抗体Luminex检测系统.分离流感疫苗接种前后健康人外周血B细胞,灭活H7N9 病毒刺激6d后, Luminex检测系统分析血清和经H7N9刺激的B细胞培养上清中的抗cH5/3抗体.结果 PCR扩增出大小约1 700 bp的目的条带,测序鉴定结果证明目的基因序列完全正确.纯化蛋白经Western blot鉴定特异性好;偶联验证实验证实cH5/3 蛋白与磁珠偶联成功.Luminx检测系统检测到所有志愿者外周血及灭活H7N9 病毒刺激的B细胞培养上清液中均存在抗cH5/3抗体.疫苗接种后的B细胞经灭活H7N9 刺激后培养上清中的抗cH5/3 抗体水平较疫苗接种前增高4.24 (0.8, 26. 8)倍.结论 成功构建抗cH5/3抗体Luminex检测系统,该检测系统检测到H7N9病毒可刺激记忆B细胞产生抗H3 杆部抗体,为广谱流感疫苗的研究提供了实验依据.