抗cH5/3抗体Luminex检测系统的构建及其在HA杆部抗体应答研究中的初步应用

摘要

目的构建抗嵌合血凝素cH5/3抗体Luminex检测系统,并初步应用于流感病毒诱导HA杆部抗体研究中对低水平抗HA杆部抗体的检测。方法根据GeneBank中A/VietNam/1203/04(H5N1)流感病毒H5头部和A/Perth/16/2009(H3N2)病毒H3杆部基因序列,人工合成嵌合血凝素cH5/3基因;构建重组Bacmid-cH5/3质粒;重组质粒在sf9细胞中包装成重组cH5/3杆状病毒,并进行PCR及测序鉴定。利用杆状病毒表达系统表达cH5/3蛋白,将纯化蛋白与活化后的微球偶联,构建抗cH5/3抗体Luminex检测系统。分离流感疫苗接种前后健康人外周血B细胞,灭活H7N9病毒刺激6d后,Luminex检测系统分析血清和经H7N9刺激的B细胞培养上清中的抗cH5/3抗体。结果PCR扩增出大小约1700 bp的目的条带,测序鉴定结果证明目的基因序列完全正确。纯化蛋白经Western blot鉴定特异性好;偶联验证实验证实cH5/3蛋白与磁珠偶联成功。Luminx检测系统检测到所有志愿者外周血及灭活H7N9病毒刺激的B细胞培养上清液中均存在抗cH5/3抗体。疫苗接种后的B细胞经灭活H7N9刺激后培养上清中的抗cH5/3抗体水平较疫苗接种前增高4.24(0.8,26.8)倍。结论成功构建抗cH5/3抗体Luminex检测系统,该检测系统检测到H7N9病毒可刺激记忆B细胞产生抗H3杆部抗体,为广谱流感疫苗的研究提供了实验依据。