右美托咪定调控miR-490-3p/ITGB1轴抑制非小细胞肺癌HCC-827细胞增殖、迁移和侵袭

摘要

目的 探讨右美托咪定(Dex)调控微RNA(miRN A)-490-3p(miR-490-3p)/整合素β1(ITGB1)轴对非小细胞肺癌(NSCLC)增殖、迁移和侵袭的影响.方法 将HCC-827细胞分为对照组(无处理)、Dex低剂量组(Dex 25 µg/L处理)、Dex中剂量组(Dex 50 μg/L处理)、Dex高剂量组(Dex 100 μg/L处理)、Dex高剂量+inhibitor NC组(转染 inhibitor NC后 Dex 100 μg/L处理)和Dex高剂量+miR-490-3p inhibitor组(转染miR-490-3p inhibitor后Dex 100 μg/L处理),每组接种6孔.二苯基四氮唑溴盐(MTT)法在490 nm波长处检测细胞光密度值(D490),5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(Edu)实验检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测细胞miR-490-3p、ITGB1信使RNA(mRNA)水平,免疫印迹法(Western blot)检测细胞增殖核抗原(Ki-67)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、ITGB1蛋白水平,双萤光素酶报告基因实验验证miR-490-3p和ITGB1的关系.建立20只肿瘤裸鼠模型,将大鼠按随机数字表法分为生理盐水对照组(CK组)和Dex组(每组10只),CK组给予生理盐水,Dex组给予20 μg·kg-1·d-1的Dex.观察肿瘤质量、肿瘤体积,FQ-PCR检测肿瘤组织miR-490-3p、ITGB1 mRNA水平,Western blot检测肿瘤组织Ki-67、MMP-9、Bax、Bcl-2、ITGB1蛋白水平.结果 与对照组比较,Dex低剂量组、Dex中剂量组、Dex高剂量组、Dex高剂量+inhibitor NC组HCC-827细胞凋亡率、miR-490-3p和Bax蛋白水平较高,细胞迁移个数和侵袭个数较少,D490(24、48 h)、细胞增殖率、ITGB1 mRNA水平和Ki-67、MMP-9、Bcl-2、ITGB1蛋白水平较低(均P＜0.05);与Dex低剂量组比较,Dex中剂量组、Dex高剂量组、Dex高剂量+inhibitor NC组HCC-827细胞凋亡率、miR-490-3p和Bax蛋白水平较高,细胞迁移个数和侵袭个数较少,D490(24、48h)、细胞增殖率、ITGB1 mRNA水平和Ki-67、MMP-9、Bcl-2、ITGB1蛋白水平较低(均P＜0.05);与Dex中剂量组比较,Dex高剂量组、Dex高剂量+inhibitor NC组HCC-827细胞凋亡率、miR-490-3p和Bax蛋白水平较高,细胞迁移个数和侵袭个数较少,D490(24、48h)、细胞增殖率、ITGB1 mRNA水平和Ki-67、MMP-9、Bcl-2、ITGB 1蛋白水平较低(均P＜0.05);与Dex高剂量+inhibitor NC组比较,Dex高剂量+miR-490-3p inhibitor组HCC-827细胞凋亡率、miR-490-3p和Bax蛋白水平较低,细胞迁移个数和侵袭个数较多,D490(24、48h)、细胞增殖率、ITGB1 mRNA水平和Ki-67、MMP-9、Bcl-2、ITGB1蛋白水平较高(均P＜0.05).与miR-NC和ITGB-WT共转染比较,miR-490-3p mimic和ITGB 1-WT共转染萤光素酶活性较低(P＜0.05).与CK组比较,Dex组肿瘤质量,肿瘤体积,ITGB1 mRNA水平,Ki-67、MMP-9、Bcl-2、ITGB 1蛋白水平较低,miR-490-3p、Bax蛋白水平较高(均P＜0.05).结论 Dex可以通过上调miR-490-3p表达、下调ITGB1表达进而抑制HCC-827细胞的增殖、迁移和侵袭.