铜绿假单胞菌假阳性株的鉴定方法比较及应用

摘要

目的 探讨提高GB 8538—2016《食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验方法》中铜绿假单胞菌的检测准确性。方法 按照GB 8538—2016,检测1份桶装饮用水样品中铜绿假单胞菌,并用16S rRNA基因测序法、API 20E试剂盒、VITEK2鉴定仪、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对分离到的“阳性菌”ZH-1和ZH-2进行确认。同时比较42℃生长试验、硝酸盐还原产气试验、API 20E试剂盒、VITEK2鉴定仪和MALDI-TOF MS的应用。结果 经多种方法确证,菌株ZH-1为铜绿假单胞菌,菌株ZH-2为恶臭假单胞菌,是GB 8538—2016检出的假阳性菌。在42℃生长试验和硝酸盐还原产气试验中,菌株ZH-2为阴性反应,不同来源的38株铜绿假单胞菌则均为阳性。此外,API 20E试剂盒和VITEK2系统对铜绿假单胞菌鉴定准确率分别为92.1%、97.4%,但API 20E试剂盒必须进行补充试验,耗时、繁琐;MALDI-TOF MS能够将铜绿假单胞菌鉴定到属水平,但种水平一致性准确率仅为43.2%。结论 在国家标准的鉴定方法基础上,增加42℃生长试验或硝酸盐还原产气试验能够排除铜绿假单胞菌假阳性菌干扰。采用VITEK2系统比API 20E试剂盒和MALDI-TOF MS更适用于铜绿假单胞菌的检测。