基于FLIM-FRET技术揭示OVCAR-3细胞膜和BSA-DOX纳米颗粒的相互作用

摘要

荧光寿命显微成像(FLIM)常用来检测活细胞内荧光基团的寿命信息,以实现微观定量分析。荧光共振能量转移(FRET)可用来表征能量从供体荧光分子到受体荧光分子的传递过程。将FLIM技术与FRET结合(FLIMFRET),可以监测活细胞中蛋白质的相互作用、亚细胞器的动态过程等。构建了以细胞膜上转染的绿色荧光蛋白(sfGFP)为供体、以阿霉素(DOX)为受体的FRET纳米体系,利用双光子激发荧光寿命显微成像(TPFLIM)系统,通过监测FRET纳米体系中供体荧光寿命的变化,研究了药物DOX在细胞中的递送机制和运输效率。此外,进一步采用四种内吞途径抑制剂,对纳米药物的内吞途径进行了评估。结果证明,牛血清白蛋白(BSA)包裹的DOX(BSADOX)纳米颗粒通过网格蛋白介导的内吞作用进入细胞。揭示了BSADOX纳米颗粒通过网格蛋白介导的内吞作用进入细胞的动态过程。研究表明,FLIMFRET技术结合定量分析方法可用于区分小分子药物和纳米颗粒与细胞作用的异同。