环状RNA hsa_circ_0008591对乳腺癌细胞生物学行为的影响

摘要

目的探讨环状RNA(circRNA)hsa_circ_0008591在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法运用高通量芯片数据分析筛选在乳腺癌组织中差异表达的circRNAs,确定hsa_circ_0008591为研究对象,并通过Sanger测序、核糖核酸酶R(RNaseR)处理等对其进行表征。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa_circ_0008591在乳腺癌组织和细胞中的表达;进一步将质粒或小干扰RNA(siRNA)转染至乳腺癌细胞,采用实时无标记细胞分析技术(RTCA)、CCK-8增殖实验、EdU增殖实验和平板克隆形成实验检测hsa_circ_0008591对细胞增殖能力的影响。运用TargetScan等数据库预测互相作用的微小RNA(miRNA)和蛋白,同时进行功能富集分析;并运用Cytoscape软件绘制竞争性内源RNA(ceRNA)调控网络。结果与癌旁组织比较,hsa_circ_0008591在乳腺癌组织中呈低表达(P=0.0076);与人正常乳腺上皮细胞比较,hsa_circ_0008591在6种乳腺癌细胞株中的表达水平明显下调(P<0.001)。体外功能实验结果表明,过表达hsa_circ_0008591可抑制MDA-MB-231(PRTCA<0.001,PEdU=0.0006,P克隆=0.0010)、MCF-7(PRTCA<0.001,PEdU=0.0017,P克隆<0.001)细胞的增殖能力,而敲减hsa_circ_0008591可促进SK-BR-3(Pcck-8<0.001,PEdU<0.001,P克隆=0.0034)细胞的增殖能力。下游靶点和通路富集分析结果显示,hsa_circ_0008591可能通过ceRNA机制或与RNA结合蛋白(RBP)相互作用抑制乳腺癌的进展。结论circRNA hsa_circ_0008591可抑制乳腺癌细胞增殖,有望成为乳腺癌治疗的有效干预靶点。