胡椒碱纯化及对H_(2)O_(2)诱导RAW264.7巨噬细胞损伤的保护作用

摘要

以白胡椒为原料,在乙醇浸提与HPD22树脂纯化胡椒碱的基础上,采用结晶法纯化胡椒碱,建立H_(2)O_(2)诱导RAW264.7细胞氧化损伤模型,采用噻唑蓝法(MTT)测定胡椒碱和H_(2)O_(2)浓度分别对细胞增殖率的影响,2’,7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠法(DCFH-DA)测定细胞内活性氧(ROS)水平,试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)释放量、总超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果表明,以无水乙醇为溶剂,将胡椒碱粗纯物配成200 mg/mL,于4℃下结晶24 h,重复结晶2次,得到胡椒碱纯度为(90.65±0.46)%。胡椒碱能显著抑制H_(2)O_(2)造成的细胞死亡,降低胞内ROS与MDA的生成,减轻LDH向细胞外扩散程度,提高SOD、CAT、GSH-Px活性。重结晶法能进一步提高胡椒碱纯度。胡椒碱对H_(2)O_(2)损伤的RAW264.7具有保护作用,其作用可能与调节细胞氧化还原系统、清除胞内活性氧水平、提高细胞内抗氧化酶系活性有关。