SYBR Green Ⅰ染料法荧光RT-PCR鉴别乙型两系流感病毒

摘要

目的建立SYBR GreenⅠ染料法荧光RT-PCR快速鉴别乙型流感病毒Yamagate系和Victoria系。方法比对乙型流感病毒Yamagate系和Victoria系的HA基因,设计特异性引物,采用SYBR GreenⅠ染料法荧光RT-PCR扩增两系病毒,进行熔解曲线分析,测定各系扩增产物的熔解温度。优化反应体系及条件,进行特异性、灵敏性及重复性评价。结果熔解曲线分析结果显示,乙型流感病毒Yamagate系和Victoria系扩增产物的熔解温度相差较大,Yamagate系为80.40℃,Victoria系为79.04℃。特异性实验表明,该方法能检测乙型流感病毒,与甲型流感病毒、冠状病毒HCoV-229E、HCoV-0C43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1等呼吸道病毒没有交叉反应。灵敏性实验表明,该方法对Yamagate系和Victoria系乙型流感病毒最低检测限均为102拷贝/μl。对105份乙型流感病毒阳性鼻咽拭子样本的检测结果与WHO的TaqMan探针法完全一致。结论建立的SYBR GreenⅠ染料法荧光RT-PCR方法可快速检测乙型流感病毒并对两系乙型流感病毒进行鉴别。