山柰酚通过Met/PI3K/Akt/mTOR通路诱导非小细胞肺癌NCI-H1650细胞发生自噬进而影响其增殖

摘要

目的：探讨山柰酚诱导人非小细胞肺癌（NSCLC）NCI-H1650细胞发生自噬及其机制。方法：常规培养NCI-H1650细胞，用不同浓度山柰酚处理细胞，用CCK-8法、MTT法以及EdU法检测山柰酚对NCI-H1650细胞增殖能力的影响，用自噬双标记腺病毒mCherry-EGFR-LC3感染实验检测山柰酚对NCI-H1650细胞发生自噬的影响，用WB法检测山柰酚处理后NCI-H1650细胞中自噬相关蛋白及Met/PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达，用qPCR法检测山柰酚处理后NCI-H1650细胞中Met mRNA的表达。采用荧光素酶标记A549-luc细胞建立裸鼠移植瘤模型后用山柰酚进行处理，用活体动物成像技术观察移植瘤生长情况，用WB法检测移植瘤组织中自噬相关蛋白以及Met/PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果：山柰酚能显著抑制NCI-H1650细胞的增殖能力（P＜0.05），山柰酚处理后NCI-H1650细胞内的自噬小体数量明显增加（P＜0.05）、自噬标志蛋白LC3B和beclin1表达均明显上调（均P＜0.05）、P62表达明显下调（P＜0.05），山柰酚可明显抑制NCI-H1650细胞中Met mRNA和蛋白的表达（均P＜0.05）、抑制p-PI3K p85、PI3K p85、p-Akt和p-mTOR蛋白表达（均P＜0.05）。山柰酚抑制A549细胞裸鼠移植瘤的生长（P＜0.05）和影响其体内自噬、Met/PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白的表达（均P＜0.05）。结论：山柰酚通过影响Met/PI3K/Akt/mTOR通路诱导NSCLC NCI-H1650细胞发生自噬，进而抑制其增殖能力。