PI3K/Akt/mTOR通路在ZEA诱导大鼠睾丸支持细胞自噬及影响其细胞周期分布中的作用

摘要

目的：探讨PI3K/Akt/mTOR信号通路在ZEA诱导睾丸支持细胞(SC)自噬及影响SC细胞周期分布中的作用,旨在揭示ZEA雄性生殖毒性机制. 方法：以Wistar大鼠原代睾丸支持细胞为材料,利用Western–blot、流式细胞术和免疫荧光技术等方法进行了ZEA对SC细胞周期分布、LC3聚点、PI3K/Akt/mTOR通路关键蛋白及细胞周期蛋白等表达的检测. 结果：结果显示,在一定的浓度范围内,随着ZEA浓度的不断升高,PI3K/Akt/mTOR通路关键蛋白磷酸化水平逐渐下降(P＜0.05或P＜0.01);加入PI3K抑制剂(LY294002)后,联合处理组与ZEA单独处理组比,Akt、m-TOR蛋白的磷酸化水平呈极显著下降(P＜0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达量呈极显著升高(P＜0.01),同时LC3的荧光信号强度显著增大,带有荧光信号细胞的个数也极显著增多,荧光聚点更加明显(P＜0.05);ZEA能引起SC细胞周期G2/M期阻滞,并下调Cdc2、CyclinB1、Cdc25等关键周期蛋白酶的表达水平;加入PI3K抑制剂(LY294002)后,ZEA致睾丸支持细胞G2/M期阻滞的比例显著降低(P＜0.05),且细胞周期关键激酶cdc2的活性呈差异显著性增强(P＜0.05). 结论：在一定浓度范围内,PI3K/AKT/mTOR信号通路在ZEA诱导SC细胞自噬中起负调控作用;ZEA影响SC细胞的周期分布,发生周期阻滞,抑制增殖.PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活可以部分逆转细胞G2/M期阻滞,从而起到保护作用.