鼠肝DNA甲基化酶的纯化及物理化学性质的研究

摘要

以Ｗｉｓｔａｒ大鼠肝为材料，确立了一个简便的纯化鼠肝ＤＮＡ甲基化酶的程序，包括：细胞的超声破碎、去内源核酸、硫酸铵盐析、磷酸纤维素亲和层析、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０凝胶过滤。用不同浓度聚丙烯酰胺凝胶电泳和孔梯度凝胶电泳检测，纯化后的酶已达电泳均一，且酶的比活力提高１１２倍。以聚丙烯酰胺孔梯度凝胶电泳测得其天然酶的分子量为３６５ｋＤ，以ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该酶有两种亚基，大亚基为９５ｋＤ，小亚基为８５ｋＤ，推测该酶由两个大亚基和两个小亚基组成。